Kit transgenèse de la levure : Expression d'une protéine de la fluorescence

Ref :117115
Réalisable sans centrifugeuse et en toute sécurité
TP démonstratif grâce à la bioluminescence
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Disponibilité :

74,17 € HT 89,00 € TTC
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Fiche technique Kit transgenèse de la levure : Expression d'une protéine de la fluorescence

Descriptif

Ce kit propose un nouveau protocole très simplifié, permettant de réaliser un transfert de gène inter-espèce. Par transgénèse, le gène codant la protéine fluorescente issue des tissus bioluminescents de la méduse va être exprimé par la levure S. cerevisiae.

Un protocole de transformation ultra simple adapté pour le milieu scolaire!
Jeulin a conçu un protocole qui ne nécessite pas de rendre les cellules compétentes. Il suffit de remettre en suspension des cellules de levures fraîches à partir d'une colonie, de mélanger avec la solution de transformation, l'ADN plasmidique, d'agiter (vortex) puis de laisser incuber 30 min à 42°C.

Les levures sont ensuite mises en culture pour vérifier l'efficacité du transfert, puis la révélation de l'expression du gène de la bioluminescence est réalisée en éclairant les boîtes aux rayonnements UV.

Conservation :
-20°C : micro-tube d'ADN si conservation longue durée sinon 4°C
4°C pour l'ensemble des solutions ainsi que le milieu pour les levures

Composition

Composition pour 15 postes :
Souche de levures sur boîte (x1)
Solution de transformation
ADN plasmidique
1 milieu prêt à couler YPD
1 milieu sélectif prêt à couler
30 Boîtes de Pétri de 55 mm,
Ensemenceur
Thème Génétique
Typologie de produits Kits SVT
Avant le TP (2-3 jours avant) : Repiquage de la souche de levure S. cerevisiae URA
- Repiquer une colonie sur un milieu frais en suivant la technique d'ensemencement par épuisement (détaillée par la suite) afin d'obtenir des colonies fraiches distinctes pour le TP (au moins 15).

Avant le TP ou le jour du TP : Préparer les boîtes de pétri pour les ensemencements des levures transformées
- Liquéfier les milieux YPD et URA- fournis en les mettant au micro-onde puiis vérifier toutes les 15-20s l'avancement de la liquéfaction, agiter manuellement pour homogénéiser.
- Couler le milieu dans les boîtes de pétri 55mm stériles fournies (15 de chaque milieu).
- Laisser le milieu se solidifier à température ambiante durant une vingtaine de minutes.
- Retourner les boîtes de pétri.
Conserver les boîtes de pétri à 37°C ou à température ambiante.

Jour du TP :
1. Prélever une colonie de 3-4mm de diamètre à l'aide d'un bâtonnet stérile (fournis dans le tube à bouchon rouge).
2. Transférer cette colonie dans un microtube stérile (fourni) contenant 125µl de solution de transformation (fourni dans le tube à bouchon rouge).
3. Homogénéiser par refoulements à l'aide d'une micropipette.
4. Ajouter 5µl de la solution fournie (tube à bouchon bleu).
5. Ajouter également 5µl de la solution DNA « Carrier », solution facilitant la transformation (fournie dans le tube à bouchon translucide).
Vous pouvez également réaliser cette étape à 37°C ou à 30°C durant 30 min ou 1 nuit à température ambiante ; les transformants seront présents mais en moins grande quantité.
8. Après l'incubation, transférer la moitié de la solution contenant les levures transformées sur une boîte de pétri contenant le milieu sélectif (URA-) préalablement préparées et l'autre moitié de la solution sur une boîte de pétri contenant le milieu YPD, qui servira de témoin.
9. Incuber les boîtes de pétri à 30°C jusqu'à l'observation des transformants (2-3 jours)
10. Visualiser l'efficacité de la transformation sous une lampe UV permettant l'observation de la fluorescence de la protéine GFP.
Conçu à partir de composants spécifiquement non pathogènes, ce kit permet de produire des micro-organismes génétiquement modifiés dont le risque pour la santé humaine et pour l'environnement est nul.

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